microRNA丨肝癌诊断的另一利器

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来源：石头道科普

小桔灯网独家授权文章

肝癌早期比较隐匿，患者确诊的时候往往已经到了中晚期。目前关于肝癌的早期诊断仍然是一门非常热门的科学问题，尽管联合检测、ctDNA的应用使得肝癌的早期诊断成为可能，但联合检测成本高，ctDNA成份少，异质性严重。MicroRNA（miRNA）是一类新型基因调节剂，其生理学机制复杂,目前主要认为是通过促进靶信使核糖核酸（mRNA）的降解或抑制其翻译过程而发挥调控作用,在细胞中具有广泛的生物学效应,参与细胞生长、增殖、分化以及死亡等诸多过程。近期发现,miRNA可能具有癌基因和抑癌基因的作用,且不同类型的肿瘤有其特异的miRNA表达谱。miRNA与肿瘤的发生、分化程度、耐药性及预后等密切相关。本推送主要介绍miRNA及miRNA肝癌诊断产品。

microRNA简介

miRNA是一种广泛存在于真核生物、大小约为20-25个核苷酸的内源性单链小分子RNA。研究发现miRNA调节人类1/3的基因,成熟的miRNA生物学效应是降解或是阻遏靶mRNA的翻译,进而参与生命过程许多的重要进程。如上所述,miRNA具有双向调控功能,在肿瘤的发生发展的基因层面上同样具有促进或者抑制作用。下面这篇张学记老师通讯的综述详细叙述了microRNA的功能及其在检测领域的应用。

近年来研究者通过基因克隆、印迹杂交、实时荧光定量聚合酶链式反应、核酸原位杂交、基因芯片及深度测序等技术检测出一系列与肝癌的发生、发展、转移相关的miRNA。相关研究也已报道miRNA-,miRNA-，miRNA-b，miRNA-，miRNA-a，miRNA-a参与肝癌的发生和转移，而miRNA-，miRNA-，miRNA-21，miRNA-18b等在肝癌的诊断、治疗及预后中起重要作用，这些miRNA分子的发现为肝癌的早期诊断和预后提供了坚实的基础。

microRNA的优势

无创

采取血液样本进行检测，对病人的损伤较小，能够克服创伤性检测带来的风险。

稳定

在临床血清、血浆样本中，microRNA以抵抗RNA酶的形式稳定存在。

早期

循环microRNA在肿瘤早期阶段（比如癌前状态、极低肿瘤负荷的时候）就已经表现出异常，因此可以用于肿瘤高危人群的预警或者肿瘤早期检测。

简便

研究蛋白型的诊断标志物需要制备抗体，而microRNA的研究方法相对简便，发现-验证-应用的周期相对可能更短。

microRNA肝癌检测产品

microRNA检测方法目前主要有两类：（1）基于探针杂交技术的检测方法：比如Northernblotting法、纳米金标记法以及桥联同位素标记法等。（2）基于扩增反应的检测方法：比如定量PCR法（qPCR）、滚环扩增法以及新一代测序技术等。qPCR法灵敏度和精确度较高，样本需求较少，目前被广泛采用。而新一代测序技术通量高，结果准确，可定量检测未知microRNA，但是检测成本相对较高。

miRNA7?肝癌分子诊断试剂盒

miRNA7?肝癌分子诊断试剂盒是由骏实生物科技（上海）有限公司开发，产品已获NMPA认证，主要采用荧光定量PCR的方法测试7种微小核糖核酸。可有效地通过比较肝细胞肝癌患者治疗前后7种miRNA表达水平的综合变化，辅助判断疾病进程或治疗效果。每次只需0.2mL血浆即可进行监测，方便医生根据诊疗需要进行多次、动态监测，辅助判断疾病进程或治疗效果。

技术原理

磁珠特异性捕获技术可有效将7种靶标miRNA从血浆中提取（miR-21,miR-26a，miR-27a，miR-，miR-，miR-，miR-）。茎环结构引物设计的qPCR技术可完成7种miRNA的量化检测。配合全自动化荧光PCR平台完成全部操作，确保检测正确。

博奥新景miRNA检测

循环microRNA+AFP联合检测技术由博医院、医院、医院等8医院合作研发。博奥新景是国内首个基因加蛋白肝癌联合筛查技术，microRNA结合常规的AFP等肿瘤蛋白标志物，不仅能够提高肝癌的早期诊断率，而且对肝炎、肝硬化患者也具有早期预警、预防、发现的作用，从而提高肝癌患者的生存率。通过采用该化学发光免疫分析仪检测血清AFP蛋白标志物和荧光定量PCR仪检测血浆microRNA标志物组合的方法，可将早期肝癌的检出率提高15%-20%，这种不同层次的组合检测对于肝癌早发现、早诊断、早治疗也蛮有意思的，也会对提高患者的生存率同样具有重要价值和临床意义。

具体检测原理和miRNA7?肝癌分子诊断试剂盒类似，从血浆中提取总RNA后，采用特异的茎环引物对目标microRNA进行混合反转录，然后基于高敏感性的TaqMan实时荧光定量PCR方法对microRNA进行定量。最后采用生物信息学分析评估受检者肿瘤发生风险，用于肿瘤的早期预警。其AFP检测采用另一份血清完成，使用化学发光法进行AFP的定量检测。

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